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Bakteriengenetik. Präparation der Gesamt-RNA aus B. subtilis Zellen, die Herstellung von Riboproben-Sonden sowie das Erlernen der Northern-Blot Methode
ISBN
9783668520844
Uitgever
GRIN Verlag
Druk vanaf
1e
Verschenen
11-09-2017
Taal
ger
Bladzijden
16 pp.
Bindwijze
ebook Adobe PDF
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Bakteriengenetik. Präparation der Gesamt-RNA aus B. subtilis Zellen, die Herstellung von Riboproben-Sonden sowie das Erlernen der Northern-Blot Methode ebook: PDF

Projektarbeit aus dem Jahr 2013 im Fachbereich Biologie - Mikrobiologie, Molekularbiologie, Note: 1,6, Universität Bayreuth, Sprache: Deutsch, Abstract: Ziel des Versuches war die Präparation der Gesamt-RNA aus B. subtilis Zellen, die Herstellung von Riboproben-Sonden sowie das Erlernen der Northern-Blot Methode. Bacillus subtilis ist ein aerobes, gram-positives, stäbchenförmiges Bakterium, als Endosporenbildner bekannt und ubiquitär verbreitet (Madigan, M. T.;Martinko, J. M.; 2009). Bacillus subtilis ist somit Umweltfaktoren, wie z. B. Temperaturschwankungen, pH-Änderungen oder antimikrobiellen Substanzen ausgesetzt. Diese auftretenden Stresssituationen wie z.B. extracytoplasmatische Signale eines Alkali-Schocks werden über eine proteolytische Signalkaskade abgebaut, wodurch der sW-Faktor freigesetzt und die Trankription des sW-Regulon eingeleitet wird. Der in der cytoplasmatischen Membran verankerte Anti-s-Faktor RsiW enthält im inaktiven Zustand den sW-Faktor. Durch den Alkalischock wird RsiW proteolytisch abgebaut und der sW-Faktor abgespalten. Der sW-Faktor ist als Regulatorprotein und ECF (extracytoplasmicfunction) bekannt (Zellmeier, S., et al., 2006). Die Aktivität des ECF wird durch den in der cytoplasmatischen Membran verankerten sW-Faktor RsiW kontrolliert. Es sind bei stressinduziertem Abbau vom Anti-sW-Faktor RsiW drei verschiedene Proteasen beteiligt. Als erstes ist die Site-1-Protease PrsW zu nennen (Heinrich, J.; Wiegert T., 2006; Ellermeier C., D.;Losick R., 2006), gefolgt von der Site-2 Protease RasP (Schöbel, S., et al., 2004) und der cytoplasmatischen ATP-anhängigen AAA-Protease ClpXP (Zellmeier, S., et al., 2006). Der freie sW-Faktor kann an das RNA-Polymerase-Core-Enzym binden, dies führt zur Transkription von Genen. Neben den Genen des sW-Faktors und des Anti-sW-Faktors RsiW gehören die Gene: yuaU, pbpE, yhaU und gyrA dazu. Hierbei dient gyrAals Kontrolle, da es konstitutiv exprimiert wird. Die Gene des sW-Faktors und des Anti-sW-Faktors befinden sich auch in einem bicistronischen, autoregulierten Operon.
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